论文题目：Validation and evaluation of reference genes for quantitative Real-Time PCR analysis in Mythimna loreyi (Lepidoptera: Noctuidae) 劳氏粘虫定量实时PCR分析参考基因的验证与评估

发表期刊：Insects

作者：王留洋（第1），张涛、宁君（通讯作者）

作者所在部门：昆虫化学生态研究室

内容简介：

定量实时PCR (qRT-PCR) 是一种广泛应用于评估目标基因表达的技术，而准确的基因表达分析需要选择合适的参考基因。本研究针对世界范围内的重要迁飞性害虫——劳氏粘虫(Mythimna loreyi)，筛选了适用于其基因表达研究的可靠参考基因。采用ΔCt方法、BestKeeper、Normfinder、GeNorm及基于网络的综合平台RefFinder，对13个候选参考基因的表达稳定性进行了全面评估。这些候选基因包括 RPL10、RPL27、RPL32、RPS3、TATA-box、GAPDH、AK、Actin、EF、α-tubulin、SOD、18S rRNA 和 FTZ-F1。结果表明，参考基因的稳定性因实验条件而异。具体而言，RPL27 和 RPL10 是评估发育阶段、组织类型及成虫年龄表达变化的最佳选择。在特定实验条件下，推荐的参考基因包括：EF 和 RPS3 用于交配状态研究，AK 和 RPL10 用于温度处理，RPL27 和 FTZ-F1 用于幼虫饮食处理，而 EF 和 RPL27 则更适用于成虫饮食处理。此外，通过对信息素结合蛋白(MlorPBP2) 和谷胱甘肽 S-转移酶 (MlorGST1) 的表达分析，验证了所筛选参考基因的可靠性。本研究为 qRT-PCR 数据的标准化提供了优化的参考基因选择，为进一步研究劳氏粘虫目标基因的表达奠定了重要基础。