论文题目："Development of enzyme-mediated duplex exponential

amplification assay for detection and identification of Meloidogyne enterolobii in field"快速检测和鉴定象耳豆根结线虫的酶介导双链指数扩增检测的方法建立

发表期刊：Microorganisms

作者：孙炳学（第1作者），马娟（通讯作者）

作者所在部门：农业线虫研究室

内容简介：

象耳豆根结线虫已成为全球农业生产中极具破坏性的病原物。其地理分布正从热带地区逐步向温带地区扩张，导致其危害症状极易与南方根结线虫等近缘种混淆。目前已建立荧光定量 PCR等分子检测技术用于象耳豆根结线虫检测，但这类方法依赖实验室级别的扩增仪器，难以满足田间现场检测需求。为此，本研究基于酶介导双链指数扩增技术（EmDEA），建立了象耳豆根结线虫检测方法。该 EmDEA 检测方法对靶标线虫具有严格特异性，在 13 种非靶标线虫及寄主组织样品中均无扩增信号。灵敏度检测结果显示：纯化 DNA 检测限为 3.6×10⁻⁴ ng/μL，单条线虫检测限可达1/1000 条，甘薯组织中为8.97 条 / 克，土壤中为4.08 条 / 100 克，灵敏度与 qPCR 相当。田间验证结果表明，该方法可成功实现现场检测：根系组织中线虫量（50.41–97.62 条 / 克）显著高于根际土壤（1.07–1.28 条 / 克）。本方法采用42 ℃恒温扩增，配合便携式温控模块，可用于田间检测；其独特的双链指数扩增机制，较常规 qPCR提前约 10 个循环（≈10 分钟） 即可判定结果。结合快速 DNA 提取流程，全程可在 40 分钟内完成，大幅提升检测效率。本研究为象耳豆根结线虫的精准监测提供了分子工具，为制定针对性防控策略提供重要支撑。